柠檬苦素通过激活 Nrf2 抗氧化途径并通过上调 Sirt1 抑制 NF-κB 炎症反应来改善对乙酰氨基酚诱导的肝毒性。
摘要来源：植物医学。 2020 年 4 月；69:153211。 Epub 2020 年 3 月 20 日。PMID：32259676
摘要作者：杨润玉、宋长琴、陈嘉熙、周吕奇、蒋秀波、曹晓梅、孙阳、张琪
文章所属单位：杨润玉摘要：
背景：柠檬苦素是一种来自柑橘类植物的生物活性化合物，具有抗氧化活性，但其对乙酰氨基酚 (APAP) 的治疗潜力 -诱导的肝毒性仍不清楚。
目的：我们的研究旨在研究柠檬苦素对 APAP 诱导的肝毒性的保护作用并阐明底层机制。
研究：设计在体外，我们选择L-02细胞建立体外APAP诱导的肝损伤模型。 L-02 细胞与柠檬苦素 (10、25、50 μM) 或 NAC (250 μM) 预孵育 2 小时后，用 APAP (7.5 mM) 处理 24 小时。在体内，我们使用 C57BL/6 小鼠作为体内 APAP 诱导的肝损伤模型。 C57BL/6 小鼠经柠檬苦素 (40、80 mg/kg) 或 NAC (150 mg/kg) 预处理 1 小时，并给予单剂量 APAP (300 mg/kg)。
方法：与柠檬苦素（10、25、50 μM）预孵育 2 小时后，用 APAP 处理 L-02 细胞（ 7.5 mM) 24 h。体外实验包括MTT测定、Annexin V/PI染色、活性氧(ROS)测量、实时定量PCR分析、Western blot分析、免疫荧光显微镜和LDH活性分析。 Nrf2 或 Sirt1 siRNA 的转染也在体外进行。在体内，C57BL/6 小鼠具有 p柠檬苦素（40、80 mg/kg）或 NAC（150 mg/kg）再治疗 1 小时，并给予单剂量 APAP（300 mg/kg）。 APAP中毒后4、12 h处死小鼠，检测血清中ALT、AST、肝组织中GSH水平、肝组织学观察及免疫组化。
结果：柠檬苦素增加细胞活力并减轻 APAP 诱导的肝细胞凋亡。柠檬苦素还通过降低 Bax/Bcl-2 的比率、恢复线粒体膜电位 (MMP)、抑制 L-02 细胞中 ROS 的产生和 caspase-3 的裂解来抑制 APAP 诱导的线粒体介导的细胞凋亡。此外，柠檬苦素诱导 Nrf2 激活，并增加其下游靶标（包括 HO-1、NQO1 和 GCLC/GCLM）的蛋白表达和 mRNA 水平。应用Nrf2 siRNA后，柠檬苦素对细胞凋亡的抑制作用和对Nrf2抗氧化途径的促进作用减弱。此外，我艾莫宁抑制 NF-κB 转录激活、NF-κB 调节基因以及炎症相关蛋白 iNOS 和 COX2 的蛋白表达。此外，柠檬苦素还增加了 Sirt1 的蛋白表达。 Sirt1 siRNA转染证实柠檬苦素通过上调Sirt1激活Nrf2抗氧化途径并抑制NF-κB炎症反应。最后，我们建立了 APAP 诱导的体内肝损伤，并证明柠檬苦素通过激活 Nrf2 抗氧化信号并通过上调 Sirt1 抑制 NF-κB 炎症反应来减轻 APAP 诱导的肝毒性。
结论：总而言之，本研究证明柠檬苦素通过激活 Nrf2 抗氧化途径并通过上调 Sirt1 抑制 NF-κB 炎症反应来减轻 APAP 诱导的肝毒性，并证明柠檬苦素具有治疗前景APAP 引起的肝损伤。