从柑橘提取物中鉴定出的橙皮苷可有效抑制 HCV 基因型 3a NS3 蛋白酶。
摘要来源：BMC 补体药物。 2022 年 4 月 2 日；22(1):98。 Epub 2022 年 4 月 2 日。PMID：35366855
摘要作者：Mahim Khan、Waqar Rauf、Fazal-E- Habib、Moazur Rahman、Shoaib Iqbal、Aamir Shehzad、Mazhar Iqbal
文章隶属关系：Mahim Khan
摘要：背景：丙型肝炎病毒感染是全球肝脏疾病的主要原因。世界不同地区已鉴定出多种 HCV 基因型。对抗 HCV 感染的有效药物是可用的，但价格昂贵，特别是对于来自资源有限国家的感染者尝试。因此，需要针对重要的 HCV 药物靶点开发具有成本效益的药物。由于柑橘类水果天然含有具有抗病毒活性的生物活性化合物，因此当前的研究旨在从柑橘类水果提取物中鉴定针对 HCV 基因型 3a 的重要药物靶点 NS3 蛋白酶的抗病毒抑制剂，该酶主要存在于南亚国家。
方法：单独的全长 NS3 蛋白酶和 NS3与同源 NS4A 辅因子融合的蛋白酶结构域在大肠杆菌中表达，并通过色谱技术纯化。使用纯化的蛋白质作为药物靶标，在 FRET 测定中评估柑橘提取物，并对接使用 ESI-MS/MS 鉴定的活性成分，以观察与 NS3 活性位点残基的相互作用。通过 FRET 测定进一步确认了相互作用最好的化合物作为 NS3 蛋白酶的抑制剂。
结果：NS3 蛋白酶结构域与 NS4A 辅因子的融合显着提高了纯化产率，并且 NS3-NS4A 在功能上比单独的全长 NS3 活性更高。纯化的蛋白（NS3- NS4A）已成功用于经过验证的 FRET 测定，以评估 14 种柑橘类水果提取物，揭示了柑橘的中果皮提取物和柑橘的整个水果提取物C. sinesis、C. aurantinum 和 C. reticulata 显着抑制 HCV NS3 蛋白酶的蛋白酶活性（IC 值为 5.79 ± 1.44 µg/mL、37.19± 5.92 µg/mL、42.62 ± 6.89 µg/mL 和分别为 57.65 ± 3.81 µg/mL）。随后的 ESI-MS 分析发现，橙皮苷大量存在于上述所有柑橘提取物中。重要的是，对接研究表明橙皮苷与活性位点残基相互作用，并充当有效的抑制剂。 NS3 蛋白酶的 IC 值为11.34 ± 3.83 µg/mL。
结论SIONS：使用 NS3-NS4A 蛋白酶开发了 FRET 测定法，该测定法已成功用于评估柑橘类水果提取物。橙皮苷是柑橘提取物中的一种化合物，被鉴定为主要类黄酮，可作为一种经济有效的 NS3 蛋白酶抑制剂，并可开发为针对 HCV 基因型 3a 的抗病毒治疗药物。