建立基于 SYBR green 的 qPCR 检测方法,用于体外和乳鼠体内快速评估和定量抗汉坦病毒化合物。
摘要来源:病毒基因。 2013 年 2 月;46(1):54-62。 Epub 2012 年 10 月 10 日。PMID:23054436
摘要作者:魏飞、李金林、凌嘉欣、陈良军、李宁、刘媛媛、罗凡、熊海荣、侯伟、杨占秋
文章来源:魏飞
摘要:汉滩病毒引起两种严重疾病,缺乏有效的治疗方法,但目前尚无有效的预防疫苗。继续探索替代抗病毒药物来治疗汉坦病毒相关综合征仍然是强制性的。基于荧光的实时定量PCR(qPCR)已成为目标基因定量的试金石。在本研究中,汉坦病毒 (HTNV)、小鼠和人甘油酯的标准曲线hyde-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH) 是通过将构建的重组质粒 pGEM-T/HTNV、pGEM-T/mouse-GAPDH 和 pGEM-T/ human-GAPDH 分别连续 10 倍稀释而产生的。间接免疫荧光法与 qPCR 法检测 HTNV 感染的 Vero E6 细胞的比较表明,后者的检测限和灵敏度有所提高。为了表征几种传统抗病毒药物(阿比朵尔和利巴韦林)和非常规抗病毒药物(吲哚美辛和姜黄素)对 HTNV 的抑制作用,测量了治疗 HTNV 感染的 Vero E6 细胞后 4 天和治疗后 18 天的病毒 RNA 水平。接种HTNV感染的乳鼠。我们的结果证实,HTNV 对利巴韦林和阿比朵尔治疗敏感,而吲哚美辛和姜黄素也可能对治疗 HTNV 感染有效。因此,qPCR的建立和应用可能成为评估潜在抗病毒药物的有用工具。r 汉滩病毒体内外感染情况。