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体外研究

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青蒿琥酯抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞迁移和侵袭的新功能。

关节炎研究。 2019 年 6 月 24 日；21(1):153。 Epub 2019 年 6 月 24 日。PMID：31234900

马建达、景军、王军伟、严涛、李千华、莫迎谦、郑东辉、高金龙、阮启安、戴烈

马建达

简介：抗疟疾药物青蒿琥酯可以抑制炎症并预防胶原诱导的关节炎中的软骨和骨质破坏大鼠模型表明它可能是治疗类风湿性关节炎（RA）的有效药物。我们的目标是投资评估其对 RA 患者成纤维样滑膜细胞 (FLS) 侵袭特性的影响。

方法：滑膜组织通过封闭式针吸活组织检查从活动性 RA 患者身上获得 FLS，并在体外分离和培养 FLS。 RA-FLS用不同浓度的青蒿琥酯治疗，同时采用甲氨蝶呤或羟氯喹作为比较药物。分别通过 CCK-8 测定、EdU 染色、Annexin V-FITC/PI 染色、transwell 测定或 F-肌动蛋白染色评估 RA-FLS 的细胞活力、增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭和假足形成。此外，通过Proteome profiler人蛋白酶阵列分析表达的蛋白酶的相对变化，并通过定量实时PCR（qPCR）、Western blot和ELISA进行验证。通过 qPCR 和 Western blot 检测 MAPK、NF-κB、AP-1 和 PI3K/Akt 通路信号分子的表达。通过 spe 敲低 PDK-1采用特异性抑制剂AR-12或siRNA转染验证青蒿琥酯对RA-FLS的药理机制。

结果：无论有或没有TNF-α刺激，青蒿琥酯均以剂量依赖性方式显着抑制RA-FLS的迁移和侵袭。该作用是通过青蒿琥酯抑制MMP-2和MMP-9的产生来介导的，并且用外源MMP-9预处理逆转了青蒿琥酯对RA-FLS侵袭的抑制作用。青蒿琥酯对RA-FLS迁移和侵袭的抑制作用较羟氯喹更强，抗炎作用也更强。青蒿琥酯和甲氨蝶呤之间检测到类似的抑制作用，并且联合使用时观察到协同作用。从机制上讲，青蒿琥酯显着抑制 PDK-1 表达以及 Akt 和 RSK2 磷酸化，其方式与 PDK-1 特异性抑制剂 AR-12 或通过 siRNA 转染敲低 PDK-1 类似。这种抑制抑制 RA-FLS 迁移和侵袭以及降低 MMP-2 和 MMP-9 表达的结果。

结论：<我们的研究表明，青蒿琥酯能够通过抑制 PDK1 诱导的 Akt 和 RSK2 磷酸化激活来抑制 RA-FLS 的迁移和侵袭，这表明青蒿琥酯可能是一种潜在的缓解 RA 疾病的抗风湿药物。